无菌检查试验介绍

无菌检查试验介绍
1.无菌检查适用于哪些样品？
无菌检查法用于检查药典要求的无菌药物.生物制品.医疗器械.原料.辅助材料和其他品种是否无菌的一种方法。试验产品符合无菌检查规定的，仅表明试验产品在检验条件下未发现微生物污染。
2.无菌检查对检测环境有什么要求？
无菌检查应在无菌环境中进行，试验环境必须满足无菌检查的要求。整个检查过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染措施不得影响试验产品中微生物的检测。单向流空气区.工作台面和受控环境应按医药工业洁净室定期悬浮颗粒.现行国家标准确认了浮游菌和沉降菌的清洁度。隔离系统应按有关要求定期验证，内部环境的清洁度应符合无菌检查的要求。日常检查应监测试验环境。
3.无菌试验需要使用哪些培养基，培养基要满足哪些要求？
硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆蛋白液体培养基应满足培养基无菌检查和灵敏度检查的要求。培养基适用性检查可在试验产品无菌检查前或与试验产品无菌检查同时进行。
4.方法适用性试验是什么？与无菌检查有什么关系？
在进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适用于产品的无菌检查。如果检验程序或产品变化可能影响检验结果，应重新进行方法适用性试验。
5.方法适用性试验
菌种制备
无菌检查试验介绍
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注：中国药典中方法验证试验与培养基灵敏度试验的区别：大肠埃希菌取代铜绿假单胞菌。
检测方法
(1)薄膜过滤法
根据试验产品的无菌检查要求，取各培养基规定的试验产品总量，按膜过滤法过滤冲洗，*后冲洗液不超过100cfu实验菌，过滤。在滤桶中加入培养基，接种金黄色葡萄球菌.大肠埃希菌.硫乙醇酸盐流体培养基加入生孢梭菌滤筒；枯草芽孢杆菌接种.白色念珠菌.在黑曲霉的滤筒中加入胰酪大豆蛋白液体培养基。另一个装有相同体积培养基的容器，加入等量试验菌作为对比。规定温度培养时间不得超过5天。
(2)直接种法
硫乙醇酸盐流体培养基6管符合直接种法培养基用量要求，分别接入不超过100条cfu金黄色葡萄球菌.大肠埃希菌.生孢梭菌各2管；取胰酪大豆蛋白琼脂培养基6管，符合直接接种法培养基用量要求，分别接入不到100管cfu枯草芽孢杆菌.白色念珠菌.黑曲霉各2根管道，其中1根管道连接到每个培训基础规定的试验产品接种量，另一根管道作为比较，规定的温度培训时间不得超过5天。
结果判断
与对照管相比，如果所有容器中的试验细菌生长良好，则试验条件下的试验量无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计。根据这种检验方法和检验条件，对试验产品进行无菌检查。
如果微生物在任何容器中生长微弱.试验量在试验条件下具有抑菌作用，可采用：
a)增加冲洗量，或增加培养基用量。
b)采用中和剂，或更换滤膜品种等方法，消除试剂的抗菌作用，并重新验证。
注：方法适用性试验可与供试产品无菌检查同时进行。
6.试品无菌检查
阳性对照
a)抗革兰氏阳性菌：金色葡萄球菌
b)抗革兰氏阴性菌：大肠埃希菌
c)抗厌氧菌：生孢梭菌
d)抗真菌：白色念珠菌
菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100cfu，培养不超过5天，应生长良好。
阴性对照
a)薄膜过滤法:相应的溶剂和稀释液.冲洗液同法操作
b)直接接种方法：未接种的培养基
阴性对照不得有菌生长。
检测方法
无菌检查方法包括膜过滤法和直接接种法。只要试验产品的形状允许，就应采用膜过滤法。试验产品无菌检查时，检验方法和检验条件应与方法适用性试验确认方法相同。检验数量由客户*。
(1)薄膜过滤法
薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，无菌检查用滤膜孔径不应大于0.45μm，滤膜直径约50mm。试液经薄膜过滤后，如需用冲洗液冲洗滤膜，每个滤膜每次冲洗量为100ml，总冲洗量不得超过5000ml，*高不超过1万000000万ml避免过滤膜上的微生物损伤。
(2)直接种法
每个容器中培养基的用量应符合接种试验产品的体积，不得超过培养基体积的10%装量不少于15ml，胰酪大豆ml。用同样的方法验证培养基的用量和高度；每种培养基接种的管数与试品的检验量相同。
培养观察
接种后培养基容器不少于14天；接种生物制品的硫乙醇酸盐流体培养基容器应放置30-35℃培养箱内培养，一份放置20-25℃厌氧培养箱内培养。在培养过程中，逐日观察并记录是否有细菌生长。
如果在加入试剂后或在培养过程中，培养基浑浊，培养14天后，不能从外观上判断是否有微生物生长，培养液不少于1ml转移到同一种培养基中，继续培养不少于4天，观察同一种新鲜培养基是否浑浊；或取培养液涂片、染色、镜检，判断是否有细菌。
结果判断
阳性对照应生长良好，阴性对照不得有细菌生长，否则试验无效。试验管道澄清，或者虽浑浊但确认无菌生长，确定符合规定；试验管道中的任何管道浑浊，确认细菌生长，判断不符合规定。当满足以下至少一个条件时，试验结果无效：
a)无菌检测试验中使用的设备和环境微生物监测结果不符合无菌检测法的要求；
b)回顾无菌试验过程，发现可能造成微生物污染的因素；
c)阴性对照管有菌生长；

d)经鉴定，供试品管中生长的微生物被证明是由于无菌试验中使用的物品和（或）无菌操作技术不当造成的。

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