【卫生湿巾检测】微生物检测方法确认概述

文章来源:http://www.xiaodulab.com 发布时间:2021-04-22

1-无菌检验方式适应性

使用药典方法进行产品无菌检查时,应进行方法适用性试验,以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时,应重新进行方法适用性试验。

薄膜过滤法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌,过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器,加入等量试验菌,作为对照。置规定温度培养,培养时间不得超过5天,各试验菌同法操作。

直接接种法取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙酵酸盐流体培养基6管,分 别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管,取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基6 管,分别接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量,另1管作为对照,置规定的温度培养,培养时间不得超过5天。

结果与对照管比较,如含供试品各容器中的试验菌均生长良好,则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用,应消除供试品的抑菌作用,并重新进行方法适用性试验。


2-非无菌产品微生物限度检查

计数方法验证的原理主要是确认样品有无抑菌性,即确认检验样品中的微生物能否在此培养基中正常生长。通常方法是在检验样品中加入代表类型的菌种(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉,加菌量应不大于100cfu),各试验菌应逐一进行验证试验。如果供试品对微生物生长具有抑制作用则需要采用适当方法消除抑制作用。按药典要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用各供试液。计数方法适用性试验中,采用平皿法或薄膜过滤法时,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5〜2范围内;采用MPN法时,试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时,计数方法应重新进行适用性试验。


3-控制菌检查方式适用性

控制菌检查法系用于在规定的试验条件下,检査供试品中是否存在特定的微生物。应根据各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应试验菌株。

按控制菌检査法取规定量供试液及不大于100cfu的试验菌接入规定的培养基中;采用薄膜过滤法时,取规定量供试液,过滤,冲洗,在最后一次冲洗液中加入试验菌,过滤后,注入规定的培养基或取出滤膜接入规定的培养基中。依相应的控制菌检査方法,在规定的温度和最短时间下培养,应能检出所加试验菌相应的反应特征。如果上述试验若检出试验菌,按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查;若未检出试验菌,应消除供试品的抑菌活性并重新进行方法适用性试验。


4-消毒剂效力验证

消毒剂指应用于表面可以杀灭细菌、真菌、病毒,但是并不一定能够杀灭它们的孢子。消毒剂常被分为高效、中效、低效消毒剂。为了避免洁净区的任何污染并保持所要求的高水平的洁净度,应制定适当的常规清洗消毒程序,同时应进行环境监控来证实环境持续受控。

国内外发布的消毒剂效力验证的指南如美国药典通则1072,国内主要包括消毒技术规范和消毒与灭菌效果的评价方法与标准(GB 15981-1995)。

消毒剂效力验证的主要内容包括实验室和现场阶段。实验室阶段考察消毒剂使用浓度和作用时间下对代表细菌的杀灭效果以确定消毒程序参数,并根据应用实际环境下的不同材质的载体,进行模拟试验。现场阶段考虑现场消毒程序验证,对于消毒房间和取样点进行风险评估并考察消毒程序的重现性。同时考虑消毒剂有效期考察:对使用新消毒剂前后环境微生物的检出频率和数量进行统计学评估。

实验室对消毒剂的杀菌效力测定方法常有定量悬浮试验法、载体浸泡定量试验法、表面试验法、工作液直接接种法等多种试验方法。效力验证使用的挑战菌种应具有代表性和普遍性。常用的标准菌种验证用菌种包括金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、沙门氏菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉;环境分离菌最具个体环境的代表性,在效力验证中应使用环境分离菌进行挑战试验。


第二期消毒产品卫生安全评价报告备案要求培训会在中山成功举行6

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