技术干货|消毒剂低温条件下消毒效果测试

文章来源:http://www.xiaodulab.com 发布时间:2021-07-15

冷链食品及运输设备在生产、装卸、运输、贮存及销售等各环节中,存在被新冠病毒污染的风险。冷链食品生产经营过程中,采用科学有效的消毒措施,对防控新冠病毒具有重要的意义。

低温情况下,常规消毒剂的消毒能力显著下降,常见的消毒方法可能会失效。低温消毒面临两大难点:第一,要安全有效,可以通过低温下消毒剂实验室消毒效果验证;第二,要验证低温环境下特定消毒方式的消毒效果,例如利用消毒剂熏蒸的化学消毒方法,通过气溶胶喷雾、超声雾化等方式使得消毒剂充满空间,如果消毒剂的冰点较高,接触到冰冷的物品容易凝结影响消毒效果。


为了更**估消毒剂低温条件下消毒效果,结合《低温消毒剂安全评价技术要求》,本研究选择两款市售低温消毒剂,采用载体浸泡定量杀菌实验,研究低温条件(-18℃和-40℃)下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果,为低温冷链消毒提供参考。实验结果如下:


1. 试验样品


两款市面上在售低温消毒剂:

①市售消毒剂A,②市售消毒剂B


2. 低温试验

取5 mL消毒液加入试管中,放入低温循环槽中,设置相应低温下(-18℃和-40℃)处理10小时,观察并记录其性状。

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低温处理后(-18℃和-40℃),消毒剂B均能保持液体、无结晶、无析出状态,可以进行下一步杀菌测试。

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消毒剂A:-18℃出现凝结

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消毒剂B:-18℃过夜保持液体

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消毒剂B:-40℃过夜保持液体


3. 低温下菌片回收情况的验证


菌载体用10 mm×10 mm平纹白布,脱脂灭菌后备用,采用滴染法染菌,室温下干燥。放入离心管中放入低温循环槽中(-18℃和-40℃)预冷30 min以上。夹出放入洗脱液中洗脱、活菌培养计数。实验重复3次。按照GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》要求菌片回收范围应为106~5×106 CFU/片。

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3次试验结果表明:上述低温预冷处理菌片回收菌落数均在杀菌试验要求范围内(106 ~5×106 CFU/片)可进行下一步杀菌测试。
4. 低温大肠杆菌中和剂鉴定结果
  按照GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》中和剂鉴定试验进行,将消毒剂预冷至-40 ℃进行试验,染菌载体用10mm×10mm脱脂平纹白布。
试验分4组:
(1) 第1组:5.0 mL中和剂+染菌载体→培养;
(2) 第2组:(含消毒剂的载体+5.0 mL中和剂)+染菌载体→培养;
(3) 第3组:5.0 mL稀释液+染菌载体→培养;
(4) 第4组:稀释液+中和剂+培养基→培养。
3次测定结果均符合以下全部情况者可判为合格:①第1、2、3组有相似量试验菌生长,且菌量在2.50×102 CFU/片~1.50×103CFU/片;②计算组间菌落数误差率,其组间菌落数误差率应不超过15%;③第4组无菌生长。

鉴定用中和剂(含1.0%甘氨酸的D/E中和肉汤),3次重复试验中, 1、2、3组间菌落误差率分别为2.85%、2.90%、3.25%。表明含1.0%甘氨酸的D/E中和肉汤可以用于该消毒剂杀菌试验。

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5. -40℃低温条件下的杀菌试验

按照《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》和GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》进行低温杀菌试验,将染菌干燥以后的菌片放置-40℃条件中预冷,按5 mL/片的量称取预冷至-40℃消毒剂于试管内,置于-40℃低温循环槽中,用无菌镊子取染菌载体,使载体完全浸没于消毒剂样品中,立即计时。将待染菌载体与消毒剂相互作用至各预定时间,分别取染菌载体加入5.0 mL中和剂试管中,混匀。经中和剂作用10 min后,振荡,将试验菌洗下,分别吸取1.0 mL样液,按活菌计数方法测定存活菌数。


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试验温度在-40℃条件下,该样品原液作用15 min,对载体中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均>3.00。

小结

1.  经过10 h过夜低温(-18℃)处理后,消毒剂A出现了结冰现象,这将严重影响其低温下正常使用(甚至无法使用)和发挥消毒效果,而消毒剂B在低温下仍能保持液体状态,可正常使用。
2.  采用滴染法制备菌片再经过低温预处理后,其回收菌落数均可达到标准要求范围,验证了《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》“实验室微生物杀灭试验”采用载体法的可行性,同时也表明试验所选菌株活性以及实验条件均符合开展低温消毒效果试验要求。
3.   消毒剂B在-40℃条件下,实验室杀菌试验显示对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有很好的消毒效果,杀灭对数值均>3.00。
参考文献:
1. GB/T 38502-2020 《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》
2. 低温消毒剂卫生安全评价技术要求(国卫办监督函﹝2020﹞1062号 附件)
3. 关于印发冷链食品生产经营新冠病毒防控技术指南和冷链食品生产经营过程新冠病毒防控消毒技术指南的通知(联防联控机制综发2020245

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