抑菌效力方法学

抑菌效力方法学
抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也被称为防腐剂。抑菌效果检查法用于确定无菌和非无菌制剂的抑菌活性，并指导制剂在研发阶段的类型和浓度。
如果药物本身没有足够的抗菌效果，应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适当的抗菌剂，防止微生物污染和繁殖，使药物变质，特别是多剂量包装制剂。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产GMP管理不能作为减少非无菌制剂微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前生物负荷的手段。所有抑菌剂都有一定的毒性，制剂中的抗菌剂量应较小有效。同时，为确保用药安全，成品制剂中抗菌剂的有效浓度应低于对人体有害的浓度。
由于药物成分或包装容器的影响，抑菌剂的抑菌效果可能会发生变化。因此，应验证成品制剂的抑菌效果在有效期内不会因储存条件而降低。
用于包装未开启的成品制剂。
培养基的制备
胰酪大豆蛋白液体培养基、胰酪大豆蛋白琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基于无菌检查方法（通则1101）。
检查培养基的适用性
用于抑菌效果测定的培养基包括成品培养基，应检查脱水培养基或按处方配制的培养基的适用性。
菌株试验中使用的菌株代数不得超过5代（从菌株保存中心获得的干燥菌株为第0代），并采用适当的菌株保存技术保存，以保证实验菌株的生物特性。
抑菌效果方法
用菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌等新鲜培养物。pH7.00无菌氯化钠.9%无菌氯化钠溶液制成适当浓度的细菌悬浮液。将黑曲霉新鲜培养物加入3~55ml适量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.00无菌氯化钠.9%的无菌氯化钠溶液将孢子洗掉。然后，将孢子悬液吸入无菌试管，用0含0的无菌氯化钠溶液将孢子吸出。.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.00无菌氯化钠.9%无菌氯化钠溶液制成适当浓度的孢子悬液。
菌液制备后放置在室温下，应在2小时内使用；若保存在2~88℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~88小时。℃，在验证的储存期内使用。
适用性检查分别接种不大于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌液至胰酪蛋白大豆琼脂培养基，每种试验菌平行制备2块平板电脑，混合、凝固，放置30~35℃培训不超过3天，计数；分别接种不超过1000次；cfu白色念珠菌、黑曲霉菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2块平板，混合凝固，放置20~25℃培述试验采用相应的对照培养基代替被检培养基。
结果表明，如果检测培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上菌落平均数的7050%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则检测培养基的适用性符合规定。
测定抑菌效果
如有必要，制剂中常见的污染微生物也可用作试验菌株。例如，含有高浓度糖的口服制剂也应使用鲁氏酵母作为试验菌株。
菌液制备试验菌新鲜培养物制备、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌如果是琼脂培养物，加入适量0.9%无菌氯化钠溶液洗去琼脂表面的培养物质，将细菌悬浮液移至无菌试管，用0%无菌氯化钠溶液洗去琼脂表面的培养物质.稀释成每19%无菌氯化钠溶液ml含菌数约为108cfu菌悬液；如果是液体培养物，离心收集菌体，用0.稀释成每19%无菌氯化钠溶液ml含菌数约为108cfu菌悬液。取黑曲霉新鲜培养物加入3~5~5ml适量含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗掉，然后用适当的方法将孢子悬液吸出无菌试管，加入适量0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.每19%无菌氯化钠溶液ml含孢子数
108cfu孢子悬液。测量1ml菌悬液中所含的菌数。
菌液制备后放置在室温下，应在2小时内使用；若保存在2~88℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~88小时。℃，一周七天内使用。
试验产品的抗菌效果可能受到试验容器特性的影响，如容器的材料、形状、体积和密封方式。因此，只要试验产品的每个包装容器都足够测试，容器就很容易根据无菌操作技术进入试验菌液、混合和取样，试验菌一般应直接种植在试验产品的原包装容器中进行测试。如果试验产品的特性或每个容器的容量等因素需要转移到无菌容器，容器的材料不得影响试验产品的特性（如吸附），
应特别注意不得影响试产品pH值，pH这个值对抑菌剂的活性有很大的影响。
取包装完整的试验产品至少54份，直接接种试验菌，或取适量试验产品分别转移到54个合适的无菌容器（如果试验菌株数超过54株，应增加相应的试验份数），每个容器接种试验菌，1g或1ml105~106cfu，接种菌液体积不得超过试剂体积的1%，充分混合，使试剂中的试验菌均匀分布，然后放置20~25℃避光贮存。
根据产品类型和规定的间隔时间，从上述每个容器中取出1个试验产品。ml(g)，确定每个测试产品中所含的细菌数量，用胰酪蛋白大豆琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基确定细菌。生存菌数测定方法及方法适用性试验“微生物限制检查：微生物计数法（通则1105）”对方法适用性试验用菌株、菌液制备及培养基适用性试验，方法适用性试验用菌回收率不低于7050%。
根据存活菌数测定结果，计算1ml(g)每个试验细菌的数量和间隔时间的数量被转换为每个试验细菌的数量lg值。

结果判断供试产品的抗菌效果评价标准，“减少的1g值”指每个间隔时间测定的菌数1g值与1ml(g)供试品中接种的菌数1g值的相差值。A”是指应达到的抑菌效果标准。在特殊情况下，如果抑菌剂可能增加不良反应的风险，至少应达到“B”抑菌效果标准。

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