几种消毒液抑菌效力的比较

目的：根据药品微生物实验室可能的污染源，选择微生物敏感的消毒液。

方法：参考药敏实验的试管法和纸片扩散法测定《中国药典》2015版四部通则1121抑菌效力检查法涉及的5 种菌株对实验室常用4 种消毒液敏感情况（即消毒液对5 种菌株的抑菌效力）。

结果：75％酒精、84 消毒液、新洁尔灭消毒液（浓度1∶8 稀释）、甲酚皂溶液四种消毒液均对5种菌株有抑制作用。

结论：药品微生物实验室，上述四种消毒液可以交替使用，遇到革兰阴性菌污染时，甲酚皂溶液的效果较好。

微生物实验室是对环境洁净级别严格控制的实验室， 对环境进行控制就需要用到消毒液。消毒液按化学结构分为含碘消毒剂类（碘伏）、过氧化物类（双氧水）、醛类（甲醛）、醇类（75％酒精）、卤素类（84 消毒液）、季铵盐类（新洁尔灭）和酚类（甲酚皂溶液）。含碘消毒剂类主要用于皮肤消毒；双氧水虽然抑菌能力强，但腐蚀性强；醛类对人体的伤害大，故前三种消毒液实验室很少用。现根据《中国药典》2015 版四部通则1121 抑菌效力检查法中规定的五种菌株， 对后四种消毒液对五种菌株的抑菌效力进行了比较，现报道如下。

1 材料

1.1 消毒液

①75％酒精批号170305， 三原宏松卫生消毒用品厂；

②84 消毒液批号170503；

③新洁尔灭消毒液批号170103；

④甲酚皂溶液批号170403；

后3 种均由德州德新康消毒用品有限公司生产。

1.2 菌种

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]

大肠埃希菌（Escherichia coli） [CMCC（B） 44 102]

白色念珠菌（Candida albicans） [CMCC（F）98 001]

黑曲霉（Aspergillusniger ） [CMCC（F）98 003]

上述标准菌株均源自中国医学细菌保藏中心， 试验的工作用菌株由中国食品药品检定研究院提供，均为第三代。

1.3 培养基

胰酪大豆胨液体培养基（TSB） 批号：160527

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA） 批号：101021

沙氏葡萄糖液体培养基（SDB） 批号：150801

上述培养基为北京陆桥技术股份有限公司生产， 适用性检查均符合《中国药典》2015 年版四部通则（1105）要求，可用于本试验。

pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[（批号：160803）生产厂家：北京陆桥技术股份有限公司]稀释菌液，点计所加菌落数。

1.4 主要仪器设备及试验器材

LRH-250A 生化培养箱， 生产厂家：韶关市宏泰医疗器械有限公司；BSC-1300IIA2 生物安全柜，生产厂家：苏州安泰空气技术有限公司；加液枪（规格1mL）已经校准，美国赛默飞世尔生产；涡旋混合器，德国IKA 生产；无菌空白药敏纸片由杭州微生物试剂有限公司提供。

2 试验方法和结果

2.1 菌液制备和试验方法

2.1.1 菌液制备

取上述金黄色葡萄球菌（简写26003）、铜绿假单胞菌（简写10104）、大肠埃希菌（简写44102）34℃培养20h 的新鲜TSB 培养物；白色念珠菌（简写98001）24℃培养2d 新鲜SDB培养物；黑曲霉（简写98003） 接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA），25℃培养7d， 用0.05％（mL/mL） 聚山梨酯80 的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液洗脱黑曲霉孢子， 均用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释，计算所加菌落数。

2.1.2 试验方法

2.1.2.1 试管法

取上述金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌TSB 培养物、白色念珠菌SDB 培养物、黑曲霉孢子菌悬液（各菌悬液用前混匀）。上述菌悬液分别浸泡饱和无菌干燥药敏纸片（直径6mm、厚度1mm、容积量20μL），每种菌液各制备5份（4 份用于4 种消毒液，1 份阳性对照检查菌落是否生长良好）纸片，等待干燥，备用。

取上述4 种消毒液分别浸泡上述含有菌液的药敏纸片，按各种消毒液要求操作（抑菌有效浓度和时间）。75％酒精（原液）浸泡2～3min、84 消毒液1∶50 稀释浸泡15min、新洁尔灭消毒液15 倍稀释液浸泡2～3min、甲酚皂溶液（原液）浸泡30min、同时取各种消毒液按使用说明规定时间及浓度浸泡无菌干燥药敏纸（作为阴性对照， 检查消毒液本身是否有菌）。取出药敏纸片分别接种于10mL 胰酪大豆胨液体培养基（TSB）中34℃培养48h；

各取TSB 培养物1 环划线接种于胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），34℃培养48h，观察TSA 平板菌落生长情况。

2.1.2.2 纸片法

将4 种消毒液（新洁尔灭消毒液浓度1∶8,其他按使用说明制备的浓度）浸泡空白药敏纸片（同上述药敏纸片）分别贴于含均匀涂有金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌、白色念珠菌的胰酪大豆胨琼脂平皿进行34℃培养20h，同样加菌量的情况下，观察消毒液抑菌透明圈大小。

2.2 试验结果

表1 试管法四种消毒液对五种菌株抑菌效果

备注：1“. +” 表示 TSB 浑浊或 TSA 有菌落生长；“-” 表示TSB 澄清或TSA 无菌落生长；

2.5 种菌落按照上述排列顺序所加的菌落数量级依次是106、106、107、105、105；

3.阴性对照检查结果说明4 种消毒液本身有无菌落生长；

4.5 种菌株自身生长良好。

表2 纸片法四种消毒液对四种菌株抑菌比较

图片

备注：抑菌圈用直径表示，单位：mm

3 讨论

3.1 上述操作含105-105的菌落加到培养基中进行培养， 划线，观察；实验发现按照消毒液使用说明进行使用，说明新洁尔灭消毒液对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌无抑菌作用。

一方面可能是菌浓度太大，消毒液量不足造成，另一方面是新洁尔灭消毒液浓度太低不足以抑制； 反复试验相同数量级的菌落浓度增大至1∶8 时，对5 种菌株均有抑制作用。因此，根据实验室交替使用4 种消毒液时，新洁尔灭消毒液不能按使用说明配制，加大浓度至1∶8 后使用。但加大浓度是否对物体表面有损伤，无相关资料报道。

3.2 试管法仅定性说明4 种消毒液（除新洁尔灭消毒液1∶8、使用说明是1∶15），按使用说明制备对药典的5 种菌株均有作用。但不能说明抑菌效果强弱。

因此， 选用纸片扩散法比较直观比较同一种菌选用不同消毒液的效果。甲酚皂溶液中每种菌株平皿抑菌圈直径约10mm,新洁尔灭消毒液在每个平皿透明圈直径约8mm，说明此两种消毒液对5 种菌株均有明显作用。而铜绿假单胞菌，大肠埃希菌对75％酒精和84 消毒液不敏感。也可能因为实验室经常用此两种消毒液，已产生耐受菌株。因此，微生物实验室消毒液交替使用很重要。

3.3 因为黒曲霉较易污染环境，纸片扩散法未选择此菌。

关键词：  抑菌效力  一次完整皮肤刺激性试验  皮肤变态反应  消毒剂紧急上市检测  致突变试验（微核试验)  医疗器械消毒剂检测

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